Produkce rekombinantní TEV proteasy v E. coli

Abstract

Jedním z hlavních cílů mé diplomové práce je provést totální syntézu genu TEV proteasy, a to pomocí komerčně získaných oligonukleotidů. Dalším bodem je optimalizovat podmínky produkce rekombinantní TEV proteasy a pro získaný protein nalézt co nejvhodnější purifikační postup s použitím různých druhů chromatografií, jako je afinitní chromatografie na imobilizovaných iontech kovů, chromatografie na iontoměničích či gelová permeační chromatografie. Nakonec je potřeba stanovit kinetické parametry (KM, kcat) jak získané, tak komerčně dodávané TEV proteasy a výsledky z obou enzymových kinetik vzájemně porovnat.