Optimalizace PCR metody pro detekci Salmonella a E. coli

Abstract

V této práci byly přiblíženy nejpoužívanější metody molekulární biologie, z nichž největší pozornost byla věnována metodě PCR. O metodě PCR bylo pojednáno v teoretické části ve dvou samostatných kapitolách. Cílem praktické části bylo optimalizovat metodu PCR pro detekci Salmonella a E. coli. Byl sledován vliv annealingové teploty na výsledek detekce. Na základě optimalizace jednotlivých detekčních reakcí byla poté provedena paralelní detekce Salmonella a E. coli metodou multiplex PCR. Jelikož byly metodou multiplex PCR detekovány všechny specifické produkty, byla tato metoda aplikována na vzorky kuřecího masa a kuřecí kůže. Z uměle zaočkovaných vzorků byla DNA získána metodou povaření v PCR pufru. Použitím tohoto postupu v kombinaci s metodou multiplex PCR bylo umožněno současně detekovat bakterii Salmonella a E. coli.